Zure hydrolyse van DNA en onderzoek van de bestanddelen

1.Onderzoeksvraag

Hoe kan je de bestanddelen van DNA aantonen?

2.Voorbereiding

Materialen

• Statief en klem
• Pipet 10 ml
• Balans
• Lepel
• 4 proefbuizen en proefbuisrek
• Erlenmeyer 100 ml
• Magneetroerder
• Verhittingsbad
• DNA
• 2 mol/l zwavelzuuroplossing
• Gedestilleerd water
• Dische reagens
• Bial-reagens
• Geconcentreerd salpeterzuur
• Ammoniummolybdaatoplossing verzadigd
• Geconcentreerd ammoniak
• Zilvernitraatoplossing 5%
• Universeel indicator

3. Werkwijze

Hydrolyse van DNA

Neem 0,2 g DNA poeder en breng dit in een erlenmeyer samen met  15 ml 2 mol/l zwavelzuur. Verwarm in een kokend waterbad.

Onderzoek van desoxyribose

2ml van het hydrolyseproduct in een proefbuis doen samen met 4 ml Dische reagens.  Breng 10 minuten in een kokend waterbad.

 

Onderzoek van fosforzuur

5 ml ammoniummolybdaatoplossing wordt samen met geconcentreerd salpeterzuur gebracht tot een optredende neerslag terug oplost. 1 ml van het hydrolyseproduct wordt toegevoegd en verwarmd in een waterbad.

 

Onderzoek van de purine base

1 ml gehydrolyseerd product wordt gebracht in geconcentreerd ammoniak en enkele druppels zilvernitraatoplossing wordt toegevoegd.

Onderzoek van ribose

5 ml Bialreagens met 0,5 ml gehydrolyseerd product voegen en in een waterbad verhitten.

 

4. Waarneming

Hydrolyse van DNA

Door hydrolyse ontstaan de bouwstenen van DNA

Onderzoek naar desoxyribose

Er ontstaan blauwe kleurstoffen. Het Dische reagens bevat difenylamine dat reageert met desoxyribose.

 

Onderzoek naar fosforzuur

Er ontstaat een gele, kristallijne fosfaatneerslag

 

Onderzoek van de purine-base

Er ontstaat een witte vlokkige neerslag. Hierbij ontstaat een zilverzout van purine-basen.

 

Onderzoek van ribose

Er treedt een groene kleur op.