Werking van proteïnasen

1.Onderzoeksvraag

Wat is de werking van proteïnasen?

2.Voorbereiding

Materialen

• Erlenmeyer
• Stoppen
• 3 proefbuizen en proefbuishouder
• Pipet 10 ml
• Magneetroerder
• Verhittingsbad
• Trechter
• Lepel
• Glazen staaf
• Thermometer
• Kippenei
• Pepsine
• Trypsine
• Natriumcarbonaatoplossing 10%
• Zoutzuuroplossing 0,1 mol/l
• Glaswol
• Gedestilleerd water

3. Werkwijze

Eiwit in een bekerglas brengen en met een vijfvoudige hoeveelheid ater overgieten. Over glaswol filtreren in een erlenmeyer en de erlenmeyer afsluiten. Verhit vervolgens tot een melkachtige suspensie ontstaat. Koel af.

Vul een eerste proefbuis met 3 ml water, 1 spatelpunt pepsine, 3 ml 0,1 mol/l zoutzuuroplossing en 3 ml eiwitsuspensie.

In een tweede proefbuis 6 ml water, 1 spatelpunt trypsine, 2 druppels 10% natriumcarbonaat en 3 ml eiwitsuspensie.

In een derde proefbuis 6 ml gedestilleerd water en 3 ml eiwitsuspensie.

Breng na goed mengen de proefbuizen in een waterbad bij 37°C tot er een reactie optreedt.

4. Waarneming

De proef toont ook aan dat enzymenwerking afhankelijk is van de pH. De optimale pH van pepsine ligt bij 1,5-2 en deze van trypsine bij 8-9. Door toevoeging van zoutzuuroplossing en natriumcarbonaatoplossing worden deze waarden ongeveer bekomen. In de eerste twee proefbuizen wordt na korte tijde een heldere oplossing bekomen. In de derde proefbuis blijft een troebele oplossing bestaan.

Door pepsine en trypsine worden peptidebindingen in eiwitten afgebroken.