Kleurstoffen in groene bladeren

1.Onderzoeksvraag

Hoe kunnen we kleurstoffen uit groene bladeren bekomen?

2.Voorbereiding

Materialen

• Aceton (F, Xi), zeezand
• Kaliumwaterstofcarbonaat
• Loopvloeistof voor chromatografie: benzine – benzine 100-140⁰C – propaan-2-ol 100:10:0.5
• Silicagel DC – folie (Polygram)
• Groene bladeren, e.B. Spinazie
• Mortier en stamper
• Trechter, filterpapier
• 10 ml maatcilinder
• Huishoudhanddoeken
• Micropipetten
• Scheidingskamer,föhn

3. Werkwijze

• Plet  de bladeren   met je vingers zo fijn  mogelijk en doe ze vervolgens in een vijzel.
• Voeg 3 spatelpunten  zeezand,1 spatelpunt  kaliumbicarbonaat en 3 – 5 ml aceton  toe en homogeniseer het  plantmateriaal met de stamper .
• Plaats een filterpapier in een trechter,    bevochtig het met aceton, bevestig de trechter in een statief en plaats er een  beker onder.
• Voer de gemalen bladeren rechtstreeks in de trechter.   Giet  indien nodig wat aceton na. Probeer   een zo  geconcentreerd  mogelijke oplossing te verkrijgen , diepgroen  van kleur. Als de kleurstofoplossing niet volledig  helder is,   moet deze opnieuw worden gefilterd.
• Dompel een micropipet onder in de  kleurstofoplossing   : de oplossing stijgt  vanzelf 1 – 2 cm  naar boven. Veeg eventuele druppels  met een papieren doek weg.
• Breng de kleurstofoplossing nu bandvormig aan,   ongeveer 1,5 cm boven  de onderrand  op de silicagel DC-folie.
• Droog de aangebrachte  band met de  föhn.
• Doe 10 ml  loopvloeistof in de scheidingskamer, sluit en schud kort zodat  stoomverzadiging ingaat.
• Plaats nu de DC folie in de  scheidingskamer.
• Na 12 – 14 min is de scheiding klaar.   Haal  de folie eruit en droog deze met de föhn.
• Vergelijk het chromatogram met de volgende schets:

4. Reflectie

Groene bladeren hebben chloroplasten (bladgroenelichamen)waarin   fotosynthese  plaatsvindt:

licht

Kooldioxide                        –>                            suiker       + zuurstof

De energie die nodig is voor deze reactie wordt geleverd  door het zonlicht.  Om dit licht te kunnen   absorberen (absorberen),   hebben de bladeren  tal van kleurstoffen:de groene kleurstoffen chlorofyl a en b en sommige gele kleurstoffen: de  carotenoïden.  Al deze kleurstoffen zijn ingebouwd in de membranen van de chloroplasten.  Aangezien deze membranen  meestal uit  vetten bestaan, moeten  deze kleurstoffen vetoplosbaar zijn, d.w.z. niet-polair.  Ze worden daarom geëxtraheerd  met niet-polaire oplosmiddelen zoals ether of aceton.