Kleurreacties met eiwitten

1.Onderzoeksvraag

Wat zijn de belangrijkste kleurreacties met eiwitten?

2.Voorbereiding

Materialen

• 5 proefbuizen
• 1 proefbuishouder
• 1 pipet 10 ml
• Bunsenbrander
• Eiwitoplossing
• Salpeterzuuroplossing 65%
•  Ammoniakoplossing 25%
• 10% natriumhydroxide oplossing
• 7% kopersulfaatoplossing
• Millons reagens: 1 ml10% precent kwiksulfaat in 10% procent zwavelzuur (zure kwiksulfaatoplossing) + 2 druppels 1% natriumnitriet (NaNO ₂) oplossing
• Albustix
• Esbachs reagens: Voeg 10 gram picrinezuur en 20 gram citroenzuur toe aan 1000 ml gedestilleerd water en meng goed. Voor een nauwkeuriger resultaat heeft een vers reagens de voorkeur.
• 0, 1 mol/l azijnzuuroplossing
• Universele indicator

3. Werkwijze

Xanthoproteïnereactie

3 ml eiwitoplossing met 1 ml salpeterzuur in een proefbuis mengen. Het mengsel voorzichtig verhitten. Laat afkoelen waardoor er vlokken worden gevormd. Decanteer de vloeistof weg en overgiet de vlokken met 4 ml ammoniakoplossing.

Millons reactie

5 ml eiwitoplossing wordt gemengd met 5 druppels Millons reagens en het mengsel wordt voorzichtig verhit.

Biureetreactie

2 ml eiwitoplossing wordt gemengd met 2 ml 10% natriumhydroxide oplossing in een proefbuis. 3 druppels kopersulfaat 7% wordt toegevoegd.

Reactie met Esbachs reagens

4 ml eiwitoplossing wordt met een gelijke hoeveelheid van het Esbachs reagens gemengd

Reactie met Albustix

5 ml eiwitoplossing wordt gemengd met zoveel azijnzuuroplossing dat het staal zwak zuur reageert. Breng de albustix in de oplossing.

4. Waarnemingen en reflectie

Xanthoproteïne reactie

Eiwitten worden door de inwerking van salpeterzuur geel gekleurd. Door toevoeging van een ammoniakoplossing wordt de verkleuring intenser oranje. Deze reactie treedt vooral op bij de aromatische aminozuren zoals fenylalanine, tryptofaan en tyrosine.

 

Millons reactie

Door het verhitten van de eiwitoplossing ontstaat een rode tot roodbruine uitvlokkende massa. Deze reactie treedt op als er tyrosine in het eiwit aanwezig is

Biureetreactie

De oplossing kleurt violet. Deze reactie treedt op bij alle verbindingen die meerdere peptidebindingen in het molecule bevatten.

Esbachsreagens

Er ontstaat een gele neerslag. Dit ontstaat door een neerslag van het eiwit.

Reactie met de albustix

De verkleuring geeft een idee over de hoeveelheid eiwit in het staal. Het kan gebruikt worden bij urine-onderzoek wat bij een positieve test de aanduiding geeft van albumine.