Extractie van melk: bepaling van vetgehalte en aantonen van eiwitten, sachariden, zetmeel

1.Onderzoeksvraag

Hoe kun je de samenstelling van melk aantonen?

2.Voorbereiding

Materialen

• Maatcilinder
• Scheitrechter
• Erlenmeyer
• Bekers reageerbuizen
• Druppelteller
• Spatel
• Warmwaterbad
• Fehling A en B
• Melk
• Ethanol
• Ammoniakoplossing
• Ether
• Petroleumether
• Azijnzuur 4 mol/l
• NaOH 4 mol/l
• Verdunde CuSO₄-oplossing
• Lugol
• MgSO₄

3. Werkwijze

1. Vetgehalte

   Breng in een scheitrechter achtereenvolgens: 10 ml melk, 10 ml ethanol, 2 ml ammoniakoplossing, 15 ml ether en 15 ml petroleumether, tussendoor goed roeren.

   Zet een stop op de scheitrechter en schud goed terwijl het gas regelmatig wordt afgelaten.
   Zet de scheitrechter vast aan een statief en laat de lagen ontmengen.

   Breng de onderste laag over in een erlenmeyer en bewaar voor later. Dit is de waterige fase met eiwitten en sachariden.

   Vang de bovenste laag op in een droge erlenmeyer en voeg 1 g MgSO₄ toe.

   Laat de erlenmeyer 10 min rusten en schud regelmatig met de erlenmeyer.

   Filtreer in een vooraf gewogen porseleinen schaaltje (m1)

   Laat de ether-petroleumlaag verdampen onder de trekkast. Weeg het porseleinen schaaltje opnieuw (m2)

   MgSO₄ wordt toegevoegd om de ether-petroleumlaag te drogen. Na uitdampen blijft het melkvet achter als een gele olie (m2-m1).

    

   2. Isoleren en aantonen van eiwit (caseïne)

   Neem de erlenmeyer met de waterige fase en voeg 2 ml azijnzuuroplossing 4 mol/l toe.

   Laat de druppels azijnzuur langzaam op één punten vallen, zonder schudden.
   Schud het mengsel om als al het azijnzuur is toegevoegd.

   Verdeel het mengsel over 2 reageerbuizen en centrifugeer

   Breng een beetje van de vaste stof over in een bekerglaasje met 20 ml water. Breng de vloeistof (sachariden) over in een erlenmeyer en bewaar voor later.

   Voeg in het bekerglaasje nog 10 druppels NaOH-oplossing 4 mol/l toe en roer goed.

   Breng een beetje van de vloeistof over in een reageerbuis en voeg 5 druppels verdund CuSO₄ toe.

    

   Door azijnzuur toe te voegen vlokt de caseïne uit. Door toevoegen van NaOH lost een gedeelte van de caseïne weer op. De violetkleuring met CuSO₄ bewijst de aanwezigheid van eiwitten, nl caseïne.

    

   3. Aantonen van een reducerend suiker: lactose

   Breng 3 ml van de oplossing in de erlenmeyer over in een schone reageerbuis en voeg toe (2 ml Fehling A + 2 ml Fehling B) of (3 ml Haines reagens)

   Verwarm in een warmwaterbad.

    

   De vorming van een rode neerslag wijst op de aanwezigheid van reducerende suikers, nl lactose

    

   4.Zetmeel

   Breng 1 ml van de oplossing in een reageerbuis

   Voeg een beetje lugoloplossing toe

    

   Er is geen verkleuring naar paars. Er is geen zetmeel aanwezig.